高血压是一种病程长、病情复杂、伴随症状多的慢性疾病[1-2]。不仅仅是高血压本身，高血压所伴随的并发症状，在疾病过程中，亦给病人带来了不可忽视的负担[3]，伴疼痛[4]、烦躁[5]、焦虑[6]等情绪，常常是高血压伴随的主要症状，而这些症状的改善，在现有的治疗中往往被忽略，但它都极大程度地影响着病人的生活质量。
根据中医治疗高血压的经验，高血压临床辨证最多的是阴虚阳亢型，常伴有身体多部位疼痛和精神焦虑的症状[7-9]。天母降压片由天麻、珍珠母、钩藤、菊花、桑葚5 味中药组成，其中君药天麻具有平肝潜阳、息风止痉的功效[10-11]，临床上常用于肝阳上亢之头痛、眩晕等症，现代药理研究证实天麻能扩张血管，缓解神经肌肉的紧张；臣药珍珠母亦具有平肝潜阳之功，与天麻相配合，能增强降压功效，提高对高血压病相关症状的治疗效果[12]；方中钩藤、菊花等其他成分的有关临床和基础研究报道中亦发现有镇痛、镇静的作用[13-14]。然而，关于天母降压片全方镇痛、镇静作用的有关研究报道较少。本研究拟通过醋酸扭体实验、热板法实验、热刺痛实验来评价天母降压片的镇痛作用；通过悬尾实验评价天母降压片的镇静作用。
1.1 药物及试剂 天母降压片粉末[华润三九(枣庄)药业有限公司，产品批号：201606]；阿司匹林肠溶片(德国，拜耳医药保健有限公司，产品批号：BJ19030)；地西泮片(山东信谊制药有限公司，产品批号：160601)；醋酸(国药集团化学试剂有限公司)。
1.2 仪器 智能热板仪：RB-200，成都泰盟软件有限公司；热刺痛仪：PL-200，成都泰盟软件有限公司；悬尾仪，TST-100，成都泰盟软件有限公司。
1.3 动物 ICR雄性小鼠，SPF级，体重18～22 g，共170只，合格证号11400700232729，许可证号SCXK(京)2016-0011。
1.4 醋酸扭体实验 动物分5组：模型组(M组， 生理盐水，8只)；阿司匹林肠溶片组[A组，45 mg/(kg·d)，8只]；天母降压片低剂量组[TL组，0.27 g/(kg·d)，8只]；天母降压片中剂量组[TM组，0.54 g/(kg·d)，8只]；天母降压片高剂量组[TH组，1.08 g/(kg·d)，8只]。生理盐水、阿司匹林肠溶片和天母降压片均灌胃给药。小鼠连续给药3 d后，于第3 天给药30 min后，腹腔注射1%醋酸，注射后5 min，观察小鼠15 min内的扭体次数，并计算扭体反应的抑制率，评价镇痛效果。
1.5 辐射热刺激实验 实验前，将小鼠置于热刺痛仪的反应容器中，待小鼠平静之后，将红外灯对准小鼠的尾部或者后掌部，小鼠产生应激反应后，记录从照射开始到甩尾反应的潜伏期(tail flick latency， TFL)作为痛阈基础值(基础TFL)，同时剔除反应时间小于2 s或者大于10 s的小鼠。24 h后给药，小鼠给药后30 min，将小鼠置于热刺痛仪的反应容器中，待小鼠平静之后，将红外灯对准小鼠的尾部或者后掌部，小鼠产生应激反应后，记录从照射开始到甩尾反应的潜伏期作为给药后TFL，并计算小鼠给药后的痛阈提高率，阈值提高率按照按如下公式计算，评价药物镇痛强度。
痛阈提高率(%)=[(给药后TFL —基础TFL)/基础TFL]×100%
1.6 热板实验 实验前，提前将热板仪的温度设定为53 ℃，待温度恒定后，将小鼠置于热板仪中，记录小鼠第一次舔后足时间及之后60 s内的舔足次数，同时剔除反应潜伏期大于60 s的小鼠。24 h后给药，小鼠给药后30 min，将小鼠置于恒温53 ℃的热板仪中，记录第一次舔后足时间和60 s内的舔足次数，并进行统计。
1.7 悬尾实验 实验前，固定小鼠尾部使其头向下悬挂，利用图像跟踪系统记录5 min内小鼠的不动时间，作为基础检测值。24 h后给药，并连续给药3 d，于第3天给药后30 min测定小鼠的不动时间，固定小鼠尾部使其头向下悬挂，利用系统记录5 min内小鼠的活动时间和不动时间，并对小鼠的不动时间进行统计。
1.8 统计学处理 计量资料用均数±标准差(
±s)表示，采用单因素方差分析。P<0.05为有统计学意义。
2.1 对ICR小鼠扭体次数的影响 小鼠在腹腔注射醋酸后，模型组扭体次数显著升高。与模型组相比，阿司匹林肠溶片组对模型小鼠扭体次数和扭体次数的抑制率均有显著改善(P<0.01)；天母降压片各剂量组均能显著降低扭体次数(P<0.01)，同时，也能显著提高醋酸扭体次数的抑制率(P<0.01)。详见图1、图2。
与M组相比，*P<0.01
图1 天母降压片对小鼠扭体次数的影响
与M组相比，*P<0.01
图2 天母降压片对扭体次数的抑制率
2.2 对ICR小鼠甩尾反应潜伏期的影响 与模型组相比，阳性药阿司匹林能显著提升ICR小鼠甩尾反应的潜伏期(P<0.01)，提升小鼠的痛阈值(P<0.01)；天母降压片各剂量组均能显著提高小鼠的甩尾反应潜伏期(P<0.01)，提升小鼠的痛阈值(P<0.01)。详见图3、图4。
与M组相比，*P<0.01
图3 天母降压片对小鼠甩尾反应潜伏期的影响
与M组相比，*P<0.01
图4 天母降压片对小鼠痛阈提高率的影响
2.3 对ICR小鼠舔足时间、舔足次数的影响 与模型组小鼠相比，阳性药阿司匹林肠溶片可延长组内小鼠的第一次舔足时间(P<0.05)，对于60 s内的舔足次数，没有改善作用；给予天母降压片各剂量组均能显著延长ICR小鼠的第一次舔足时间(P<0.01)，天母降压片高剂量组显著降低小鼠60 s内的舔足次数(P<0.01)，中剂量组能明显降低小鼠的舔足次数(P<0.05)。详见图5、图6。
与M组相比，*P<0.05
图5 天母降压片对小鼠第一次舔足时间的影响
与M组相比，*P<0.05，**P<0.01
图6 天母降压片对小鼠第一次舔足后60 s内舔足次数的影响
2.4 对ICR小鼠不动时间的影响 与模型组相比，阳性药地西泮片能显著升高小鼠的不动时间(P<0.01)；天母降压片各剂量组均能明显提高小鼠的不动时间(P<0.05)。详见图7。
与M组相比，*P<0.05，**P<0.01
图7 天母降压片对小鼠不动时间的影响
在高血压的病理进程中，疼痛是病人最易感受，但在治疗上往往被忽视的一个伴随症状，很大程度上影响着病人的生活和生存质量。疼痛根据痛觉感受器发生部位的不同，可以分为外周性疼痛与中枢性疼痛[15]，具有疼痛缓解作用的药物也可分为中枢性镇痛药和外周性镇痛药[16]。本研究主要采用醋酸扭体实验[17]、热辐射甩尾实验[18]、热板实验[19]3方法，检测天母降压片的镇痛作用效果及作用机制。
醋酸扭体实验因为其方法简便、灵敏、重现性好，并且没有明显的中枢性或外周性筛选区分的特点，常被用作镇痛药物的初筛研究中。本实验结果显示，天母降压片各剂量组均具有较好的镇痛作用。
为了进一步确定天母降压片的镇痛机制，本实验进一步进行热辐射实验和热板实验。热辐射甩尾实验是一种将强光照射到动物尾部，一段时间后，动物因热刺痛而产生逃跑反应或者避害甩尾反应的实验方法。因为逃跑反应是由大脑所控制的复杂生物现象，甩尾是脊柱反射调节的现象，所以，热辐射甩尾实验常被用作评价效价较强，并且作用机制可能涉及中枢镇痛的镇痛药物药效评价。本实验结果显示，天母降压片各组能够显著提高动物的痛阈值，并且可能是由于其对神经中枢突触信号的阻断而使动物痛阈值升高所导致的。同时，热板实验也对天母降压片可能作用于中枢镇痛给予验证。热板实验是一种将动物放置于热板上，动物在一段时间后会舔足以降温的实验方法。在该实验中，将动物放置于热板上到动物出现第一次舔足的动作时间间隔，被定义为痛阈；而在规定时间内舔足次数的多少，反应动物对热板刺激所带来疼痛的敏感程度。因为舔足反应需要由中枢神经系统对动物的行为做出协调性的指示，所以这一模型常用作效价较强的中枢镇痛药物的评价研究中。本实验中，天母降压片各剂量组能显著增加第一次舔足时间，提高动物的痛阈值；天母降压片各剂量组能明显提高实验动物对热刺激的耐受程度。其作用机制与天母降压片的中枢镇痛作用有关。
本实验采用悬尾实验检测天母降压片的镇静作用。在连续给药3 d后，天母降压片可显著延长不动时间，增加不动时间的延长时间，提示天母降压片能够对高血压病理进程中的烦躁现象有一定程度的改善作用。
天母降压片具有较为显著的镇静和镇痛作用，提示天母降压片能在降压的同时，通过改善病人的疼痛和精神状态，起到对高血压的综合治疗作用。
[1] HOROWITZ B,MISKULIN D,ZAGER P.Epidemiology of hypertension in CKD[J].Advances in Chronic Kidney Disease,2015,22(2):88-95.
[2] SAFAR M E,SMULYAN H.Hypertension in women[J].American Journal of Hypertension,2004,17(1):82-87.
[3] DELCROIX M,HOWARD L.Pulmonary arterial hypertension:the burden of disease and impact on quality of life[J].Eur Respir Rev,2015,24(138):621-629.
[4] MARCELLA S,MICHELE M,GIUSEPPE R,et al.The relationship between blood pressure and pain[J].Journal of Clinical Hypertension,2013,15(8):600-605.
[5] FRENCH L K,CAMPBELL J,HENDRICKSON R G.A hypertensive child with irritability and a rash[J].Pediatric Emergency Care,2012,28(6):581.
[6] ALC
NTARA C,EDMONDSON D,MOISE N,et al.Anxiety sensitivity and medication nonadherence in patients with uncontrolled hypertension[J].Journal of Psychosomatic Research,2014,77(4):283-286.
[7] 吕珊.针药联合治疗高血压病(阴虚阳亢证)合并焦虑抑郁状态临床观察[D].长春:长春中医药大学,2016.
[8] 伍惠惠,王茹,杨丹.针刺联合放血疗法治疗阴虚阳亢型面痛验案一例[J].中西医结合心血管病电子杂志,2018,6(17):28-30.
[9] 马利利,王长海,李龙,等.肝阳上亢型高血压病的中医治疗研究进展[J].中西医结合心脑血管病杂志,2012,10(1):83-85.
[10] 罗琳璇,汪涛,孙兰军.天麻治疗高血压病的研究进展[J].中西医结合心脑血管病杂志,2014,12(11):1392-1393.
[11] 单雅蒙,王洋,徐贵成.天麻治疗高血压病研究进展[J].世界中医药,2017,12(12):3182-3185.
[12] 马洪田,郭雪申.珍珠降压包合物治疗高血压病的实验研究[J].光明中医,2012,27(11):2191-2193.
[13] 王智先,张少强,杜武勋,等.天麻钩藤饮治疗肝阳上亢型高血压病机制探讨[J].中医杂志,2013,54(22):1911-1913.
[14] 张留记,张海波,屠万倩,等.怀菊花总黄酮对自发性高血压大鼠的降压作用及机制研究[J].天然产物研究与开发,2015,27(4):592-597.
[15] HOFFMAN D.Central and peripheral pain generators in women with chronic pelvic pain:patient centered assessment and treatment[J].Current Rheumatology Reviews,2015,11(2):146-166.
[16] PORAS H,BONNARD E,DANG É E,et al.New orally active dual enkephalinase inhibitors (DENKIs) for central and peripheral pain treatment[J].Journal of Medicinal Chemistry,2014,57(13):5748-5763.
[17] GU W,AO G,ZHU Y,et al.Autophagy and cathepsin L are involved in the antinociceptive effect of DMBC in a mouse acetic acid-writhing model[J].Acta Pharmacol Sin,2013,34(8):1007.
[18] CROSBY S J,KNAPP C M,KORNETSKY C.Nociceptive threshold and analgesic response to morphine in aged and young adult rats as determined by thermal radiation and intracerebral electrical stimulation[J].Pharmacology Biochemistry & Behavior,2006,84(1):148-157.
[19] HUNSKAAR S,BERGE O G,HOLE K.A modified hot-plate test sensitive to mild analgesics[J].Behavioural Brain Research,1986,21(2):101.